实验方法
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小鼠基因型PCR鉴定方法
1.将小鼠剪尾巴0.5~1cm左右。2.添加 200 µl Direct PCR 裂解缓冲液和 10 µl 蛋白酶 K（20mg/ml，-20 oC）。3.65 oC 孵育过夜。4.在 85 oC下加热样品 45 分钟以灭活蛋白酶 K。5.…
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计算单位体积质粒的拷贝数（copy number）
第一步，计算质粒的分子量。假设一个DNA碱基对（bp）的平均重量为650道尔顿（Da），一摩尔的碱基对（bp）的重量为650克，即任何双链DNA模板的分子量可以通过取其长度（bp）与每个碱基对重量的乘积来估计。 First, …
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流式细胞仪（FACS）原理及其应用注意事项
流式细胞术(FCM)定义: FCM是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的技术。 特点: 单细胞的流动的， 活细胞的 定量的，多参数的，高统计学精度的，分选细胞。 (一）仪器基本组成结构 …
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MFI: 用image J测量计算荧光染色的mean fluorescence intensity
1、加开图像后，提取出单一通道（Image-Color-Split Channels） 2、调整阈值，选择适当的区域（Image-Adjust-Threshold） 注意： 如果图片上有比例尺，必须调节Threshold，或者框选比例尺的区…
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Matrigel使用：包被成功判断与絮状物
涂有Matrigel的盘子或平板在室温（约21°C）下孵化1小时，或在4°C的冰箱中孵化一夜后即可使用。它们可以在4°C下储存达一周。孵化或储存在冰箱中时，应使用干净的保鲜膜（或同等的材料）覆盖以防止溢出。避免倾斜以防止Matrigel的表…
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从小鼠皮肤伤口分离巨噬细胞用于单细胞RNA测序
了解组织修复中的巨噬细胞异质性是一个重大挑战。在这里，我们描述了一个协议，它结合了从皮肤伤口中分离免疫细胞和随后基于流式细胞仪的伤口巨噬细胞分拣和单细胞RNA测序。我们使用原始Smart-seq2协议的修改版来提高速度和准确性。该协议对于分…
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小鼠HER2+乳腺癌脑转移的稳定同位素追踪和稳态代谢组学的优化方案
Optimized protocol for stable isotope tracing and steady-state metabolomics in mouse HER2+ breast cancer brain metastasi…
