小鼠基因型PCR鉴定方法

1.将小鼠剪尾巴0.5~1cm左右。
2.添加 200 µl Direct PCR 裂解缓冲液和 10 µl 蛋白酶 K(20mg/ml,-20 oC)。
3.65 oC 孵育过夜。
4.在 85 oC下加热样品 45 分钟以灭活蛋白酶 K。
5.PCR反应配制与条件

 试剂

(µl)

5 ×Gotaq PCR Buffer

4

MgCl2 (50mM)

0.8

dNTPs (10mM)

0.5

Primer Mix ( 10µM)

1

Tail DNA

2

Gotaq polymerase

0.2

ddH2O

11.5

总体积 20

 

Step 1: 95oC, 4min
Step 2: 95oC, 30 sec
Step 3: 55 or 60 oC, 30 sec
Step 4: 72oC, 1 min
Step 5: Repeat steps 2-4 for 40 cycles
Step 6: 72oC,10 min.

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