小鼠基因型PCR鉴定方法

1.将小鼠剪尾巴0.5~1cm左右。
2.添加 200 µl Direct PCR 裂解缓冲液和 10 µl 蛋白酶 K(20mg/ml,-20 oC)。
3.65 oC 孵育过夜。
4.在 85 oC下加热样品 45 分钟以灭活蛋白酶 K。
5.PCR反应配制与条件

 试剂

(µl)

5 ×Gotaq PCR Buffer

4

MgCl2 (50mM)

0.8

dNTPs (10mM)

0.5

Primer Mix ( 10µM)

1

Tail DNA

2

Gotaq polymerase

0.2

ddH2O

11.5

总体积 20

 

Step 1: 95oC, 4min
Step 2: 95oC, 30 sec
Step 3: 55 or 60 oC, 30 sec
Step 4: 72oC, 1 min
Step 5: Repeat steps 2-4 for 40 cycles
Step 6: 72oC,10 min.

如若转载,请注明出处:https://www.ouq.net/2149.html

(0)
打赏 微信打赏,为服务器增加50M流量 微信打赏,为服务器增加50M流量 支付宝打赏,为服务器增加50M流量 支付宝打赏,为服务器增加50M流量
上一篇 08/20/2022 16:45
下一篇 09/05/2022 23:51

相关推荐

  • Kozak序列的功能和应用

    Kozak 序列是在真核生物的mRNA中共有的(gcc)gccRccAUGG序列 。它在翻译过程的启动中扮演了重要角色。 Kozak 序列通常被认为是 GCCGCCACCATGG,其中 ATG 是起始密码子(通常是信号序列的起始)。建议使用…

    11/02/2024
    1.1K
  • 常用疼痛动物模型

    神经病理性疼痛模型 1. 皮质和丘脑痛模型造模方法:通过向躯体感觉皮质或丘脑核团微量注射兴奋性毒性物质(如苦味毒素或红藻氨酸)诱导疼痛。直接在丘脑注射IV型胶原常用于模拟出血性脑卒中。该模型可导致机械和热痛敏,伴随自发疼痛行为,如抬举、摇动…

    实验方法 11/01/2024
    156
  • Transwell孔径0.4um3um8um选择原则

    在实验中使用Transwell®通透性支持物时选择合适的孔径也是十分重要的。常用最小孔径的Tanswell膜(0.4um )主要应用于药物转导研究。细胞侵袭,趋化性和运动性研究通常采用3.0um或以上的孔径的Tranwell膜。 细胞从膜的…

    05/06/2024
    225
  • CRISPR质粒区别

    PX330; SpCas9 and single guide RNA PX458; SpCas9-2A-EGFP and single guide RNA PX459; SpCas9-2A-Puro and single guide RNA…

    实验方法 04/07/2024
    434
  • 如何设计质粒载体

    设计质粒载体是一项复杂而有趣的任务,通常需要考虑到载体的用途、宿主细胞类型、表达水平、选用的启动子、标签等多个因素。以下是设计质粒载体的一些建议步骤: 明确研究目的: 定义质粒的主要用途,是用于表达蛋白质、RNA干扰、基因编辑等。 确定宿主…

    实验方法 12/27/2023
    534