实验技术
-
CRISPR PX330 sgRNA质粒克隆构建方法
sgRNA design Figure 1. From Staying on target with CRISPR-Cas . Dana Carroll , Nature Biotechnology 31,807–809 (201…
-
小鼠基因型PCR鉴定方法
1.将小鼠剪尾巴0.5~1cm左右。2.添加 200 µl Direct PCR 裂解缓冲液和 10 µl 蛋白酶 K(20mg/ml,-20 oC)。3.65 oC 孵育过夜。4.在 85 oC下加热样品 45 分钟以灭活蛋白酶 K。5.…
-
AAV/Lenti滴度qPCR鉴定引物序列
引物名称 序列 Forward primer 5’-CCCACTTGGCAGTACATCAA-3’ Reverse primer 5’-GCCAAGTAGGAAAGTCCCAT-3’ 引物Blast结果: Sequence (5′…
-
计算单位体积质粒的拷贝数(copy number)
第一步,计算质粒的分子量。假设一个DNA碱基对(bp)的平均重量为650道尔顿(Da),一摩尔的碱基对(bp)的重量为650克,即任何双链DNA模板的分子量可以通过取其长度(bp)与每个碱基对重量的乘积来估计。 First, …
-
AAV纯化试剂配制和浓度
AAV碘克沙醇纯化法常用试剂配制浓度 5 M NaCl 146.1 g NaCl Up to 500 mL Ultrapure water 1 M Tris HCl (pH 8.5) 12.11 g Tris base Up to 100 …
-
流式细胞仪(FACS)原理及其应用注意事项
流式细胞术(FCM)定义: FCM是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的技术。 特点: 单细胞的流动的, 活细胞的 定量的,多参数的,高统计学精度的,分选细胞。 (一)仪器基本组成结构 …
-
MFI: 用image J测量计算荧光染色的mean fluorescence intensity
1、加开图像后,提取出单一通道(Image-Color-Split Channels) 2、调整阈值,选择适当的区域(Image-Adjust-Threshold) 注意: 如果图片上有比例尺,必须调节Threshold,或者框选比例尺的区…
-
噬菌体稀释和储存缓冲液配制SM Buffer
SM buffer 配方: 200 mM NaCl2 10 mM MgSO4 50 mM Tris-HCl, pH 7.5 配制过程: 1.称取 11.7 g NaCl2 和 1.4 g MgSO4 并添加到干净的 1L 蓝盖烧瓶或其他高压…
-
20X SSPE配制配方
NaCl 0.15M; Sodium citrate 0.01M; EDTA 0.001M 加入1L去离子水。 pH 7.25~7.55
-
Matrigel使用:包被成功判断与絮状物
涂有Matrigel的盘子或平板在室温(约21°C)下孵化1小时,或在4°C的冰箱中孵化一夜后即可使用。它们可以在4°C下储存达一周。孵化或储存在冰箱中时,应使用干净的保鲜膜(或同等的材料)覆盖以防止溢出。避免倾斜以防止Matrigel的表…