实验方法
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人外周血 T 细胞分离方法
本节介绍从全血中分离外周血单个核细胞 (PBMC) 和pan T 细胞富集的方法。在分离 PBMC 时，可以使用多种不同的来源样品（如：全血、血沉棕黄层、白细胞减少系统室等）。 注…
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CRISPR PX330 sgRNA质粒克隆构建方法
sgRNA design Figure 1. From Staying on target with CRISPR-Cas . Dana Carroll , Nature…
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小鼠基因型PCR鉴定方法
1.将小鼠剪尾巴0.5~1cm左右。2.添加 200 µl Direct PCR 裂解缓冲液和 10 µl 蛋白酶 K（20mg/ml，-20 oC）。3.65 oC 孵育过夜。4…
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计算单位体积质粒的拷贝数（copy number）
第一步，计算质粒的分子量。假设一个DNA碱基对（bp）的平均重量为650道尔顿（Da），一摩尔的碱基对（bp）的重量为650克，即任何双链DNA模板的分子量可以通过取…
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流式细胞仪（FACS）原理及其应用注意事项
流式细胞术(FCM)定义: FCM是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的技术。 特点: 单细胞的流动的， 活细胞的 定量的，多参…
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MFI: 用image J测量计算荧光染色的mean fluorescence intensity
1、加开图像后，提取出单一通道（Image-Color-Split Channels） 2、调整阈值，选择适当的区域（Image-Adjust-Threshold） 注意： 如果图…
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Matrigel使用：包被成功判断与絮状物
涂有Matrigel的盘子或平板在室温（约21°C）下孵化1小时，或在4°C的冰箱中孵化一夜后即可使用。它们可以在4°C下储存达一周。孵化或储存在冰箱中时，应使用干净的保鲜膜（或同…
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从小鼠皮肤伤口分离巨噬细胞用于单细胞RNA测序
了解组织修复中的巨噬细胞异质性是一个重大挑战。在这里，我们描述了一个协议，它结合了从皮肤伤口中分离免疫细胞和随后基于流式细胞仪的伤口巨噬细胞分拣和单细胞RNA测序。我们使用原始Sm…
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小鼠HER2+乳腺癌脑转移的稳定同位素追踪和稳态代谢组学的优化方案
Optimized protocol for stable isotope tracing and steady-state metabolomics in mouse HER2+…
