线粒体膜电位和检测（JC-1 染色）-mitochondrial membrane potential (∆Ψmt)

由电子传递链产生的线粒体膜电位(ΔΨm) 是健康线粒体功能所必需的关键参数。它与质子梯度一起产生线粒体ATP 合成背后的驱动力。线粒体膜电位荧光探针有JC-1、Rh123、TMRM、TMRE、和DiOC6等。膜渗透性 JC-1 染色方法被广泛用于细胞凋亡研究，以监测线粒体健康。在多种细胞（包括肌细胞、神经元细胞）以及完整组织和离体线粒体中，JC-1 染料可用做线粒体膜电位的指示剂。检测线粒体膜电位的探针带正电荷，导致它们积聚在带负电的线粒体内部。线粒体膜电位变化可以通过各种荧光技术进行检测，如流式细胞分析和荧光成像。线粒体选择性试剂使研究人员能够探测线粒体的健康、定位和丰度，以及筛选和监测一些药物试剂的作用。J-聚集体什么时候形成？

JC-10 双发射 ΔΨm 探针

JC-10 是 JC-1 的衍生物，是一种电位依赖性探针，用于通过流式细胞术、荧光显微镜和基于微孔板的荧光检测来确定 ΔΨm。在健康细胞中，JC-10 选择性地积聚在线粒体中，产生橙色 J 聚集体，在 590 nm 处表现出广泛的激发光谱和发射大值。然而，在具有低 ΔΨm 的凋亡和坏死细胞中，JC-10 从线粒体中扩散出来，并产生 JC-10 单体，导致向绿色发射（525 nm）转变。它已成功用作各种样品类型中的 ΔΨm 指示剂，包括肌细胞、神经元、完整组织和分离的线粒体。

JC-10的特点

易于使用：JC-10 在稀释到水性缓冲液中时不会沉淀，从而了伪影
稳定：JC-10 具有更小的检测偏差，因为它在水性介质中具有更高的溶解度和更高的灵敏度
增强信号：JC-10 具有比 JC-1 更高的信号背景比
增强的灵敏度：在所有检测细胞系中，JC-10 能够比 JC-1 更好地检测 ΔΨm 损失的细微变化
广泛的应用：JC-10 可用于原代大鼠肝细胞
方便：JC-10 与荧光酶标仪、细胞成像仪和流式细胞仪兼容

在较高浓度（0.1μM以上的水溶液）或较高电位下，JC-1染料单体集聚形成红色荧光”J-聚集体”，并在线粒体内积累。J-聚集体形成了较宽激发光谱和在约590nm处有最大发射峰。当JC-1染料在线粒体浓度较低或低膜电位情况下，它以单体形式存在，发射波长为529nm。

线粒体选择性罗丹明酯

可渗透细胞的阳离子罗丹明，如 TMRE 和 TMRM，很容易被活性线粒体隔离，通常用于标记活细胞中的线粒体。与 JC-10 一样，线粒体中的 TMRE 和 TMRM 摄取由线粒体膜电位驱动。两种染料均已成功用于动态和原位定量检测，筛选线粒体过渡孔的抑制剂，评估活细胞中线粒体的功能，并可用于区分活细胞和非活细胞群。这些电位染料表现出小的自淬灭、低细胞毒性和合理的光稳定性，它们的荧光强度可以用流式细胞仪或荧光显微镜检测。与 TMRM 相比，TMRE 疏水性更强。

线粒体 (Mitochondria) 是细胞中重要的细胞器之一，可以为细胞活力提供能量。近年有报道去极化线粒体的积累引起的阿尔茨海默病 (Alzheimer’s Disease) 与帕金森病(Parkinson’s Disease)，可能与线粒体自噬有关。线粒体自噬是一种清除机制，可以通过自噬，将氧化应激、DNA损伤因素导致功能失调的线粒体隔离包裹成自噬体(Autophagosome)，再与溶酶体 (Lysosome) 融合后降解。含Mtphagy Dye (用于检测线粒体自噬) 和Lyso Dye (溶酶体染料)。Mtphagy Dye通过化学结合，固定在细胞内的线粒体上，会发出较弱的荧光。当线粒体发生自噬，损伤的线粒体会与溶酶体融合，pH会下降，变成酸性，此时Mtphagy Dye会产生较强的荧光。如想直观观察Mtphagy Dye标记的线粒体和溶酶体的结合，可联合应用试剂盒中的Lyso Dye (标记溶酶体) 进行双染。