荧光原位杂交技术FISH

概述：

原位杂交技术是以核酸分子碱基互补配对的原理为基础的实验技术。通过标记的核酸分子（探针，Probe）与目标核酸分子杂交，再用相应的方法检测探针的存在，从而揭示靶部位目标分子的位置。最早的原位杂交技术出现于 1969 年，Gall 和 Pardue 利用H³标记的核糖体 RNA 与非洲爪蟾的卵母细胞杂交，揭示了核糖体 RNA 基因的基因扩增现象（Gall & Pardue, 1969）。

早期的原位杂交技术使用放射性标记，存在诸多弊端。1985 年 Rayburn 等首次将生物素（Biotin）标记的重复序列定位到小麦的中期分裂相上（Rayburn &Gill, 1985），开创了非放射性标记的杂交技术。由于非放射性标记的原位杂交技术具有安全、经济、灵敏度高等优点，因而迅速发展起来。

荧光原位杂交技术（Fluorescence in situ hybridization, FISH）是指利用荧光信号检测探针的原位杂交技术。广义上讲，FISH 靶序列可以是 DNA 或者 RNA，既可以用来进行基因组层面的研究，也可以进行表达层面的研究。

目的：

用于基因定性、定量、整合、表达等方面的研究。

原理：

FISH 技术的基本原理是基于核酸分子碱基配对的原则，将染色体或细胞核DNA 与探针分别变性后，将探针杂交至靶部位，然后使用荧光显微镜检测杂交信号。探针可以直接用荧光物质标记（直接法），也可以使用一些抗原物质标记，然后采用荧光标记的抗体与探针上的标记物结合（间接法）。相对而言，间接法荧光原位杂交相对应用更广。

步骤：